StemSure(R) 细胞冻存液 人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用

本产品是可用于冻存以小鼠 ES 细胞为代表的各种通用细胞株的无血清型细胞冻存液。含 BSA 和 10% DMSO 。标准测试中用小鼠 ES 细胞 D3 株冻存、复苏，确认其细胞存活率。本产品采用缓慢冻存法冻存细胞，无需使用程序降温盒。

使用本产品对小鼠 ES 细胞 D3 株在 -80℃ 进行保存，可冻存２年；普通细胞在 -150℃ 下可冻存 30 个月，并且可维持很高的存活率。

另外，本产品已确认可用于冻存人 iPS 细胞。

●  可在维持人 iPS 细胞、小鼠 ES 细胞未分化能力的状态下，直接进行冻存。

●  可在 -80℃ 下进行长时间冻存。

●  冻存的通用动物细胞株的细胞存活率好。

●  无血清型

●  无需自行配制试剂

●  无需使用程序降温盒

●  细胞存活率时间（使用小鼠 ES 细胞 D3 株进行实验）

●  无菌实验

●  内毒素实验

●  支原体实验

①  去除人 iP S细胞培养皿中的营养液，用 PBS 清洗后，用 Accutase 等剥离细胞。

②  添加含有 10 μmol/L Y-27632的人 iPS 培养基（hPSC 培养基（+ROCKi）），用移液器吹打成单细胞。

③  将吹打分散的细胞悬浮液移至样本管，离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清液。

④  添加含 hPSC 培养基（+ROCKi）的培养基，用移液器悬浮。

⑤  计算细胞数量。

⑥  以１×10⁶ cells/管分注在细胞悬浮液保存管中。

⑦  离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清液。

⑧  使用 50 μL/管本产品进行悬浮，在 -80℃ 下进行冻存。

①  在冻存管中添加 hPSC 培养基（+ROCKi），复苏冻结细胞（不使用温水浴法）。

②  离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清，再次添加 hPSC 培养基（+ROCKi），悬浮。

③  计算细胞数量。

④  在培养皿中按照２×10⁵ cells/6 cm 进行细胞培养。

①  收集细胞至样本管中。

②  离心，去除上清。

③  在样本管中加入本产品，悬浮。

④  分注至悬浮液保存管中。

⑤  将保存管在-80℃冻洁一晚。

⑥  保存于-150℃或-80℃

①  将冻存管置于37℃的水浴槽中解冻。

②  在培养用的培养基中进行悬浮。

③  离心去除上清后用培养基进行重悬。

④  在培养容器内培养细胞。

将人 iPS 细胞 201B7 株分散为单细胞后，在 StemSure^® 冻存液中悬浮，并在-80℃下冻存４天。反复冻结、复苏３次之后，确认细胞存活率和各种未分化标记（Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81）的表达。

①  在 1 mL本产品中悬浮１~2×10⁶ cells，分注至冻存管中。

②  在 -80℃冻存１天后转移至-150℃冻存。或者在-80℃冻存。

③  在37℃的温浴槽中复苏。

④  在细胞培养基中悬浮、离心。

⑤  弃上清，用细胞培养基重悬细胞并进行培养。

培养细胞数：500个细胞/孔（含胶原蛋白涂层的６孔板）

培养时间：10天

用 StemSure^® 细胞冻存液冻存各种动物细胞株。可确认到冻存30个月后仍维持高存活率，且复苏后细胞可移植。

①  在 1 mL本品中悬浮 1~2×10⁶ cells，分注至冻存管中。

②  在-80℃冻存1天后转移至-150℃分别冻存２个月、４个月、30个月。

③  在37℃的水浴槽中复苏。

④  细胞培养用培养基中悬浮、离心。

本系列产品适用于培养 ES 细胞和 iPS 细胞。每个批次产品都适用小鼠 ES 细胞 D3 细胞系进行品质实验检测。

rBC2LCN 可特异性识别未分化的人ES/iPS细胞。将本产品添加至含有人ES/iPS细胞的培养液中，可对活性状态下的未分化细胞进行染色。

FUJIFILM Wako 充分准备了以液体培养基为代表的平衡盐溶液、细胞分离·分散用溶液、抗生物素溶液、细胞外基质等产品。

2007年 iPS 细胞树突发表后，许多与iPS细胞有关的文献被发表出来。FUJIFILM Wako 推出了在各个文献中都有所报道的与维持ES细胞·iPS细胞的未分化能和分化诱导相关的低分子化合物。

LIF 具有抑制小鼠 ES 细胞分化的作用，因此可在培养细胞时，用来维持 ES 细胞的未分化状态。